Как следует проводить лабораторные испытания в условиях регламентируемого качества

В этой статье рассматриваются некоторые принципы проведения лабораторных испытаний в условиях регламентируемого качества, а также описаны показатели контроля и методы, соблюдение которых обеспечит получение качественных, воспроизводимых, достоверных и валидных аналитических данных.

Аналитические методики испытаний

Все аналитические испытания должны проводиться в соответствии с описанными, валидированными и утвержденными методиками, которые в зависимости от ситуации называют: аналитическими методиками, методиками испытаний, аналитическими методиками испытаний. Методика должна быть написана таким образом, чтобы квалифицированный, но незнакомый с ней специалист мог прочитать ее и воспроизвести по ней анализ без обращения к составившему её лицу за разъяснениями.

Описанные аналитические методики должны содержать следующие пункты:

Введение: в этом разделе указывают цель и краткое описание методики.

Область применения: в этом разделе указывают, к каким образцам применима методика и включают любые ограничения ее применения, например, фаза клинического исследования.

Оборудование: в этом разделе указывают требования к оборудованию, включая любые специальные требования, например, определенный прибор или определенная конфигурация, также в этом разделе должны быть указаны спецификации хроматографической колонки.

Реактивы: в этом разделе перечисляют все необходимые реактивы вместе с требованиями к их чистоте.

Приготовление растворителей и реактивов для проведения испытания: в этом разделе описывают порядок приготовления подвижной фазы для ВЭЖХ, экстрагентов для приготовления испытуемых растворов, сред для теста «Растворение» и т. д.

Стандартные растворы: в этом разделе описывают порядок приготовления стандартных растворов.

Требования к пригодности системы: в этом разделе перечисляют все обязательные требования к пригодности системы.

Испытуемые растворы: в этом разделе описывают порядок приготовления испытуемых растворов.

Расчеты: в этом разделе подробно и четко описывают формулы и методики обсчета результатов по выходным данным прибора, на основании которых подготавливают конечные результаты.

Требования к сообщению результатов: в этом разделе описывают порядок сообщения результатов, например, число десятичных знаков или значащих цифр.

Все указания в методике должны быть представлены в виде пронумерованного списка, например:

Приготовление испытуемого раствора

  1. Испытуемый раствор приготавливают в двух повторах.
  2. Десять таблеток AAA-122 25 мг помещают в маркированную мерную колбу вместимостью 100 мл.
  3. Прибавляют около 60 мл экстрагента.
  4. Обрабатывают ультразвуком в течение 15 минут и вращательными движениями перемешивают содержимое колбы.
  5. Обрабатывают ультразвуком в течение дополнительных 15 минут и повторно вращательными движениями перемешивают содержимое колбы.
  6. Обрабатывают ультразвуком еще раз в течение дополнительных 15 минут и повторно вращательными движениями перемешивают содержимое колбы.
  7. Охлаждают до комнатной температуры.
  8. Доводят до метки экстрагентом и тщательно перемешивают.
  9. Декантируют часть суспензии в маркированную центрифужную пробирку с пробкой и центрифугируют в центрифуге с радиусом 300 мм при 3000 об/мин в течение 10 минут.
  10. 10 мл надосадочной жидкости с помощью пипетки переносят в маркированную мерную колбу вместимостью 100 мл.
  11. Доводят до метки экстрагентом и тщательно перемешивают.
  12. Приготовленные образцы являются испытуемыми растворами.

Следовать указаниям методики, представленным в таком виде, намного легче, а вероятность пропуска какого-либо этапа значительно ниже, нежели, когда указания даны в виде неразрывного текста, как показано ниже:

Испытуемый раствор приготавливают в двух повторах. Десять таблеток AAA-122 25 мг помещают в маркированную мерную колбу вместимостью 100 мл и прибавляют около 60 мл экстрагента. Обрабатывают ультразвуком в течение 15 минут и вращательными движениями перемешивают содержимое колбы, обрабатывают ультразвуком в течение дополнительных 15 минут и повторно вращательными движениями перемешивают содержимое колбы, обрабатывают ультразвуком еще раз в течение дополнительных 15 минут и повторно вращательными движениями перемешивают содержимое колбы. Охлаждают до комнатной температуры, доводят до метки экстрагентом и тщательно перемешивают. Часть суспензии декантируют в маркированную центрифужную пробирку с пробкой и центрифугируют в центрифуге с радиусом 300 мм при 3000 об/мин в течение 10 минут. 10 мл надосадочной жидкости с помощью пипетки переносят в маркированную мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят до метки экстрагентом мл и тщательно перемешивают. Приготовленные образцы являются испытуемыми растворами.

Обеспечение правильности стандартного образца

В основу большинства аналитических методик заложено сравнение выходных данных прибора, например, площади пика, полученных для испытуемого раствора с выходными данными прибора для стандартного раствора с известной концентрацией. Соответственно правильность концентрации стандартного образца является залогом правильного конечного результата. Поэтому, обязательно следует подтвердить то, что концентрация стандартного раствора (-ов) является правильной.

Если предполагается, что полученные результаты будут попадать в диапазон ±25 %, то этого можно достичь путем приготовления отдельных стандартных растворов в двух повторах. Степень извлечения одного стандартного образца относительно другого стандартного образца определяют следующим образом:

Степень извлечения стандартного образца, % = Площадь пика стандартного образца 1 × Навеска стандартного образца 2 × 100
Площадь пика стандартного образца 2 Навеска стандартного образца 1

Степень извлечения стандартного образца в диапазоне 98,0—102,0 %, как правило, считают достаточным подтверждением правильности стандартного раствора.

Если предполагается, что полученные результаты будут выходить за пределы диапазона ±25 %, то следует приготовить ряд отдельных стандартных растворов с концентрациями, которые будут охватывать предполагаемые концентрации испытуемого раствора, а также следует определить корреляцию между выходными данными прибора и концентрациями стандартных растворов. Значение коэффициента корреляции (r) ≥ 0,999, как правило, считают приемлемым.

Испытания на пригодность системы

Испытания на пригодность системы являются неотъемлемой частью аналитической методики и предназначены для подтверждения того, что на протяжении всего анализа прибор функционирует в соответствии с установленными для него спецификациями.

Минимальные требования к испытанию на пригодность системы включают:

  • Подтверждение отсутствия загрязнения, мешающего проведению анализа; перед выполнением анализа любого стандартного образца или испытуемого образца выполняют один или несколько анализов холостой пробы и удостоверяются в отсутствии в выходных данных каких-либо помех.
  • Определение воспроизводимости по измерениям пяти или шести стандартных образцов в начале аналитического цикла. Типичной нормой для этого показателя является относительное стандартное отклонение ≤ 2,0 %.
  • Выполнение с определенной периодичностью на протяжении всего аналитического цикла измерений степени извлечения стандартного образца, как правило после каждых пяти или шести испытуемых образцов, а также в конце аналитического цикла. Типичная норма для степени извлечения составляет 98,0—102,0 %.

Кроме того, для хроматографических методик должны быть установлены типичные хроматографические показатели, например, указанные в таблице 4.

Таблица 4: типичные хроматографические показатели, используемые в испытании на пригодность системы, с типичными для них нормами

Хроматографический показатель Типичная норма
Число теоретических тарелок (изократическое элюирование) ≥ 1000
Число теоретических тарелок (градиентное элюирование) ≥ 10000
Коэффициент асимметрии пика 0,75—1,5
Разрешение пиков ≥ 2,0

Хорошей практикой считается подтверждение соответствия нормам всех показателей пригодности системы и степени извлечения стандартного образца до начала приготовления каких-либо испытуемых образцов. В этом случае, если показатели степени извлечения стандартного образца и пригодности системы не будут отвечать нормам, то вы не потратите зря время на приготовление испытуемых образцов, которые в итоге невозможно будет проанализировать или придется забраковать их в ходе анализа.

Контроль интегрирования хроматографического пика

Количественный анализ данных хроматографических методик включает определение площади соответствующего пика. Все программные пакеты обработки хроматографических данных могут выполнять эту задачу автоматически. Для этого необходимо выбрать подходящие значения параметров интегрирования, которые управляют этим процессом. Названия этих параметров зависят от используемого программного пакета обработки данных и могут варьировать. К числу наиболее распространенных относятся чувствительность к изменению наклона (slope sensitivity), ширина пика (peak width), порог шума (noise threshold), порог площади (area threshold) и коэффициент группировки (bunching factor).

В общем процесс заключается в манипуляции соответствующими параметрами интегрирования до тех пор, пока не будет достигнуто правильное интегрирование. С точки зрения обеспечения качества и достоверности данных этот процесс задевает несколько аспектов:

  • Что собой представляет правильное интегрирование?
  • Потенциальная манипуляция конечными результатами путем корректировки интегрирования пика для получения соответствующего норме результата.

В настоящее время эти аспекты часто привлекают внимание регуляторных органов. Очевидно, что манипуляция площадью пика для получения результата, соответствующего норме, который в противном случае не попал бы в эти пределы, является недопустимой. Регуляторные органы требуют, чтобы выбор наиболее подходящих параметров интегрирования регламентировался СОП и осуществлялся в соответствии с предварительно установленным, научно обоснованным методом. После валидации методики для всех последующих анализов должны использоваться одни и те же параметры интегрирования.

Все процессы повторного интегрирования должны быть объяснены и обоснованы. Многократное выполнение повторного интегрирования хроматограмм без соответствующего объяснения недопустимо.

 

Оригинальная статья

Подписывайтесь на каналы PHARM COMMUNITY:

   
Поделитесь с коллегами:

Оставьте комментарий