Очень интересная статья, содержащая информацию, которая, как я думаю, будет полезна не только с точки зрения применения в промышленности, но и для использования в повседневной личной жизни. В ней описываются разные примечательные особенности плесневых грибов, понимание которых поможет вам предотвратить появление этих микроорганизмов в ваших помещениях. Также я буду благодарен за критические замечания и исправления профессиональных микологов, если такие появятся в читателях или микробиологов, специализирующихся на данной тематике.
Введение
В течение многих лет контаминация плесневыми грибами считается серьезной опасностью как в жилых, так и в промышленных помещениях. Однако в последние года проблемы контаминации плесневыми грибами фармацевтических препаратов привлекли к себе внимание и регулирующих органов. После обнаружения этих микроорганизмов в препаратах и гибели пациентов регуляторные органы полностью сосредоточились на производственных аптеках, которые, как утверждается, не соблюдали собственные методы контроля контаминации (1).
Несмотря на то, что вокруг этой темы очень много шума, однако также мало и понимания природы плесневых грибов, причины их появления в чистых помещениях и механизма их благополучного быстрого роста в среде чистых помещений. Невозможно поместить все «плесневые грибы» в одну корзину, поскольку они весьма своенравны. Чтобы обосновать эту точку зрения давайте рассмотрим плесневые грибы, найденные в ныне знаменитой аптеке «New England Compounding Center» (NECC). Exserohilum rostratum, Aspergillus fumigatus и широко распространенный в чистых помещениях плесневый гриб Cladosporium были теми изолятами, которых извлекли из стерильных препаратов, асептически приготовленных в аптеке с ненадлежащим соблюдением требований. Весьма интересно было наблюдать по всему Интернету, когда Exerohilum упоминали как черную плесень, а Aspergillus как обычную плесень, поскольку существует множество других черных и обычных плесневых грибов, поэтому такое их обобщение может привести к неправильным представлениям об их характеристиках. Это произошло из-за того, что в публикациях, описывающих инцидент с NECC, не были представлены важные характеристики Exserohilum rostratum и Aspergillus fumigatus.
Aspergillus fumigatus — это гриб, споры которого встречаются повсюду в воздухе, он также является оппортунистическим человеческим патогеном у людей с ослабленным иммунитетом и вызывает потенциально смертельные инвазивные инфекции. Известно, что этот вид размножается бесполым путем (A. fumigatus — бесполое размножение). Тем не менее, этот плесневый гриб также обладает и полностью функциональным половым репродуктивным циклом, который приводит к образованию клейстотециев и аскоспор, являющихся телеоморфной/половой стадией под названием Neosartorya fumigata. Именно такое рассмотрение и понимание фазоспецифических структур позволяет успешно уничтожать плесневые грибы. Плесневый гриб в бесполой фазе может быть уничтожен многими дезинфицирующими средствами, в то время как в половой фазе его невозможно уничтожить даже спорицидными средствами, если во время дезинфекции не использовано правильное время обработки и разведение. Также это является основной причиной, обуславливающей проведение квалификационных исследований дезинфицирующих средств.
Аналогично Exserohilum rostratum представляет собой бесполую стадию (анаморфу), в то время как Setosphaeria rostrata является половой стадией (телеоморфом) того же плесневого гриба.
Микробиологи в лаборатории контроля качества (КК) часто не являются микробиологами по специальности. Многие биохимики или другие специалисты изучали методы микробиологических испытаний. Однако отсутствие понимания природы плесневых грибов, их происхождения, способов распространения, размножения и заражения являются теми факторами, которые приводят к контаминации продукции продуктами жизнедеятельности плесневых грибов, что ведет к нежелательным последствиям.
Природа грибов
Грибы не являются ни растениями, ни животными, однако обладают некоторыми характеристиками обоих царств. Они не могут двигаться, как животные, однако потребляют органические вещества, не имеют хлорофилла, как растения и не могут синтезировать собственные источники энергии. Их клетки имеют истинное ядро и способны размножаться половым путем за счет слияния ядер одинаковых штаммов. Они также могут размножаться путем спорообразования, как некоторые ранние растения, такие как папоротники и мхи. С помощью современных молекулярных методов было показано, что грибы более тесно связаны с животными, чем с растениями.
Большинство структур грибов, выделенных из чистых помещений, являются микроскопическими и не видны невооруженным глазом. Некоторые из них являются одноклеточными, как дрожжи, но у большинства клетки соединяются в длинные нитевидные филаменты, называемые гифами. Большинство мицелиальных (нитчатых) грибов создают из гиф обширную систему тяжей, которые могут быть видны при плотном росте в массе, именуемой мицелием, которую также часто просто называют плесенью. Мицелий может быть любого размера, от крошечных пучков или кластеров до значительных структур, которые эффективно образуют питающее и растущее тело гриба. Низшие грибы или микрогрибы, как их часто называют, образуют на их поверхности бесполые споры путем простого отпочковывания от кончиков их воздушных гиф и не образуют никаких видимых структур. Подавляющее большинство грибов, обнаруженных в чистых помещениях, таких как Penicillium или Aspergillus, относятся к этому типу. В случае высших грибов или макрогрибов, когда они готовы к размножению гифы двух разных родителей сливаются и образуют плотную структуру, называемую спорокарпом, аскокарпом в случае Ascomycetes и базидиокарпом у Basidiomycetes. Шляпочные грибы являются базидиокарпами. Половые споры образуются внутри спорокарпа или на нём после слияния ядер разных родителей (2).
Классификация
Начиная с 18-го века грибы классифицируют в соответствии с их морфологией (например, по таким характеристикам как цвет, форма и размер споры), специальными микроскопическими особенностями или физиологией (3). В ближайшем будущем в таксономию может быть включен анализ ДНК, однако это будет представлять серьезную проблему для исторически сложившейся классификации, основанной на морфологии и других признаках, которую используют по настоящее время и к которой привыкли микологи. Грибы также можно классифицировать в соответствии с их клинической значимостью.
Не вдаваясь в детали классификации, такие как типы и семейства, в этой статье предложена простая схема классификации, помогающая разделить каждый класс по отличительным морфологическим и микроскопическим характеристикам. Основные характеристики каждой группы представлены ниже:
Зигомицеты (Zygomycetes)
Эта группа имеет несептированные гифы, а также как половой, так и бесполый способы размножения, которые реализуются за счет производства половых спор, известных как зигоспоры и бесполых спорангиоспор, соответственно.
Хлебная плесень Rhizopus stolonifer также относится к этому классу. Cunnighamella, Syncephalastrum, Absidia, Rhizopus и Mucor являются одними из самых распространенных изолятов чистых помещений, принадлежащих к этому классу грибов.
| Несептированные гифы | Бесполая репродуктивная структура зигомицетов (спорангий) |
 |  |
Аскомицеты (Ascomycetes)
Эта группа имеет септированные гифы и только фазу полового размножения, половые споры образуются внутри мешка, называемого аском (сумкой), поэтому они также известны как сумчатые грибы. Аски образуются внутри структуры, называемой аскокарпом (4).
Из распространенных изолятов чистых помещений к этому классу относятся Eurotium, Chaetomium и Microascus.
| Септированная гифа | Аскокарп аскомицетов (с любезного разрешения APS Press) |
 |  |
Базидиомицеты (Basidiomycetes)
Членов этого класса также называют базидиальные грибы (5). После слияния половых клеток, они начинают делиться и производят утолщенную на одном конце структуру, называемую базидием. На кончиках базидиев половым путем формируются базидиоспоры. Базидии часто встречаются на огромных, видимых, плодовых телах, называемых базидиокарпами. Типичный шляпочный гриб является базидиокарпом. В условиях чистых помещений базидиокарпы не должны наблюдаться 🙂
Дейтеромицеты (Deuteromycetes)
Эти грибы имеют септированные гифы, не имеют идентифицированного полового цикла размножения и считаются «несовершенными», поэтому и называются «несовершенные грибы» («Fungi Imperfecti») (3). Если у гриба обнаруживают наличие полового цикла, то обычно его реклассифицируют из этого класса в один из других классов. Типичным примером дейтеромицетов, у которого есть половая стадия, является Eurotium, а его бесполой стадией является Aspergillus glaucus.
Для этого класса описаны два типа гиф. У грибов первого типа септированные гифы неокрашенные («гиалиновые») и, следовательно, во время исследования легко окрашиваются в синий цвет лактофенолом-аналин синим, а у грибов второго типа гифы окрашенные (dematiaceous). Термин «dematiaceous» (окрашенный) связан с характерным темным внешним видом этой группы грибов, когда они растут на агаре. Колонии обычно темно-серые, коричневые или черные и, что более важно, при рассмотрении пластинки агара с обратной стороны они имеют темноокрашенную нижнюю сторону. Этим окрашенные дейтеромицеты отличаются от гиалиновых дейтеромицетов (4). Гиалиновые дейтеромицеты могут иметь темные споры, однако гифы у них бесцветные и, соответственно, неокрашенные при осмотре агаровой пластинки с обратной стороны. Aspergillus, Penicillium, Fusarium и Verticillium являются типичными представителями гиалиновых дейтеромицетов, в то время как Alternaria, Ulocladium, Cladosporium и Epicoccum являются типичными представителями пигментированных или окрашенных дейтеромицетов.
| Гиалиновые дейтеромицеты | Окрашенные дейтеромицеты |
 |  |
Жилые и промышленные помещения, включая чистые помещения, как правило имеют весьма сложную конструкцию и содержат множество компонентов и систем различного назначения. Эти компоненты и системы могут служить микробиологическими резервуарами, например, известно, что плесневые грибы могут развиваться в системах отопления, вентиляции и кондиционирования воздуха (HVAC), поэтому эти системы требуют регулярного обслуживания и восстановления. Материалы, используемые в строительстве чистых помещений, такие как гипсовые панели, бумага, древесина и т. д., могут быть источником проблем, поскольку они представляют пищевую ценность для грибов и способны поглощать влагу. Деревянные и бумажные изделия, как известно, чувствительны к влаге, что приводит к проблемам их заражения грибами и последующему гниению (7).
Далее указаны несколько плесневых грибов, которые весьма бурно растут на материалах на основе целлюлозы: Cladosporium, Eurotium, Exophiala, Fusarium, Paecilomyces, Acremonium, а также Aspergillus, Aureobasidium, Chaetomium, Penicillium, Stachybotrys, Trichoderma, Ulocladium. Многие из них прекрасно растут на краске, клеях и пластмассах, а некоторые также растут на цементной и минеральной изоляции. Поэтому решающую роль играет управление чистыми помещениями, поскольку источники питания для плесневых грибов всегда присутствует в строительных материалах этих помещений.
Хорошо известно, что грибы и бактерии воздействуют на здоровье человека. Многие виды грибов могут вызывать инфекционные заболевания. Они также вырабатывают широкий спектр химических бипродуктов, называемых микотоксинами, которые в основном связаны со спорами и оказывают многочисленные эффекты на здоровье, в первую очередь, при их попадании внутрь организма (7). Грибы также содержат аллергены и вещества, выступающие в роли пускового механизма астмы (триггеры астмы). Среди хорошо изученных эффектов грибковых спор, вызывающих астму, часто упоминается Alternaria alternata, распространенный изолят внутренних и чистых помещений. Грибковые глюканы вызывают воспалительные процессы в легких и, как сообщается, связаны с развитием головных болей. Причинами периодического появления плесневых грибов в чистых помещениях могут быть ненадлежащие процедуры переодевания и несоответствующие требованиям потоки персонала и материалов. Тем не менее, нередко обнаруживается значительная контаминация плесневыми грибами окружающей среды чистого помещения и продукта вследствие одной или нескольких следующих причин:
- рост плесневых грибов в неочищенных холодовых комнатах или холодильниках, где хранятся материалы
- ненадлежащим образом очищенные инкубаторы
- наличие мест нарушения герметичности в чистых помещениях
- не выполнение обслуживания систем HVAC и высокоэффективных специальных воздушных фильтров (HEPA)
- несоответствующие требованиям перепады давления между контролируемыми зонами
- редко очищаемые склады
- картонные коробки, деревянные поддоны и многое другое.
В чистых помещениях с неподдерживаемой влажностью плесневые грибы могут расти в стенах, которые являются для них обеспечивающей рост питательной средой.
Грибы, важные с медицинской точки зрения
Изоляты грибов, извлеченные в ходе испытания препарата, могут иметь клиническое значение и могут быть нежелательными в зависимости от способа введения препарата и группы пациентов, поэтому имеет смысл разобраться с клиническим значением распространенных грибов, извлеченных из чистых помещений и препарата (9). В общем грибковые инфекции (микозы) классифицируют на поверхностные, системные и оппортунистические (2).
Предотвращение появления плесневых грибов
Грибы создают множество проблем в фармацевтической, медико-инструментальной, диагностической, пищевой и косметической промышленности, начиная от структурного повреждения чистых помещений вследствие плохого обслуживания и заканчивая контаминацией органического и неорганического сырья, и порчей продукции за счет преодоления защитных свойств консервантов. Контаминация грибами приводит к многочисленным трудностям, таким как: отзывы продукции, экономические потери, вопросы со стороны регулирующих органов, проблемы с безопасностью пациентов и ущерб для имиджа, вследствие негативного общественного отношения. В каждой категории было отмечено значительное количество отзывов продукции, в том числе в категории сырья и расходных материалов для чистых помещений.
Сказать, что в чистом помещении не будет плесневых грибов все равно, что принять желаемое за действительное. Тем не менее, появление плесневых грибов можно предотвратить и контролировать их распространение. Появление плесневых грибов можно предотвратить с помощью:
- ограничения их попадания в чистую зону
- устранение источника питания, обеспечивающего их рост в чистом помещении.
Конструкционные материалы чистых помещений могут подвергаться контаминации плесневыми грибами по многим причинам. Гипсокартон может повредиться в результате воздействия воды, особенно если гипсокартонная стена подвергается такому воздействию в течение длительного периода времени. Часто во время постройки чистого помещения может произойти непреднамеренное попадание воды в гипсокартонную стену, особенно, если она контактирует с водой у основания в месте соприкосновения с полом, в результате чего возникает капиллярное затекание. За счет капиллярного эффекта влага может проникать в любое место на расстояние от нескольких дюймов до нескольких футов от пола, все зависит от периода времени, на протяжении которого стена контактирует с водой. Вода, которая попадает в помещение из-под потолка, может привести к отслоению от него потолочной армирующей ленты в результате чего непосредственно за лентой образуются щели, в которых выступающие части гипсокартона могут пропитываться водой. Чрезмерная очистка поверхностей чистых помещений, особенно когда конструкция старая, может привести к тому, что влага просочится в стены и полы чистого помещения.
Неправильно обслуживаемые системы HVAC могут нести риск контаминации плесневыми грибами либо вследствие поврежденных фильтров, либо вследствие утечек. Наполнитель фильтра состоит из боросиликатных волокон, однако существует много других компонентов, таких как ламинированная фанера, ДСП, прокладки и герметики, которые в случае отсутствия обслуживания могут обеспечить прекрасную питательную среду для роста и размножения плесневых грибов. Кроме того, если фильтрующий материал нарушен физически, то частицы вместе с плесневыми грибами могут попадать в чистое помещение.
Склады зачастую не контролируются и большинство материалов хранятся в картонных коробках или на поддонах. Плесневые грибы расщепляют целлюлозу до простых сахаров, которые затем привлекают другие низшие плесневые грибы, дрожжевые грибы и бактерий. Оба эти вещества являются источником пищи для плесневых грибов, поэтому материалы, поступающие со склада в чистые помещения, должны быть тщательно очищены. Кроме того, неправильно спроектированные потоки персонала и материалов могут способствовать переносу плесневых грибов с материалами или персоналом в чистые зоны. Плесневые грибы подобно бактериям в изобилии присутствуют в почве, поэтому следует строго соблюдать процедуры переодевания, а клейкие коврики использовать в соответствии с их конструкцией и предназначением, а также часто менять, чтобы предотвратить занесение спор плесневых грибов в чистые зоны вместе с грунтом. Часто персонал чистых помещений наступает на клейкие коврики после надевания одноразовых бахил. Функция клейких ковриков состоит в удалении грязи с подошвы уличной обуви. При наступании на клейкие коврики после надевания бахил происходит загрязнение последних, вследствие чего подошва бахил становится подобна ситу, через которое во время перемещения по чистому помещению просачивается грунт.
Наличие картонных коробок вблизи или внутри чистых помещений увеличивает шансы загрязнения плесневыми грибами. Аналогичную угрозу несут и поддоны. Часто халаты хранят в картонных коробках на неконтролируемом складе. Несмотря на то, что халаты могут находиться в двойной упаковке и проходить финишную стерилизацию, споры плесневых грибов из картонных коробок могут попадать на упакованные халаты, за счет этого они легко попадают в зоны переодевания, а затем в чистые зоны. Иногда небольшая, невидимая и постоянная негерметичность может обеспечить неконтролируемый рост плесневых грибов в стенах. Наблюдение за изменением цвета или внешнего вида поверхностей чистых помещений может дать подсказки о размножении плесневых грибов в стенах и под полом. Поврежденные плинтусы являются еще одной распространенной причиной проникновения плесневых грибов в стены и полы чистых помещений. Во время очистки стен в чистых помещениях вода просачивается сквозь стену и плинтус, создавая тем самым среду для роста этих грибов под полами и в стенах. Известно, что лужи воды вокруг зданий вызывают загрязнение чистых производственных объектов плесневыми грибами.
Фактически, плесневые грибы появляются в любом месте, где есть даже небольшое количество органического материала и влаги. Хорошими примерами являются холодильные помещения и холодильники. Продукция, питательные среды и другие материалы, хранящиеся в холодильниках, часто являются источниками занесения плесневых грибов в производственные зоны или лаборатории. Картонные коробки, хранящиеся в холодильных помещениях и холодильниках, являются прямым источником контаминации в ходе технологического процесса или контаминации испытуемых образцов.
Достаточно много задокументированных подтверждений о том, что инкубаторы также являются источником контаминации плесневыми грибами. Плесневые грибы растут на стенах и полах инкубаторов и могут оставаться незамеченными. Часто результаты лабораторных исследований, свидетельствующие о наличии плесневых грибов, могут быть обусловлены загрязненными этими грибами инкубаторами, а не загрязненным продуктом. Водяные бани, если они не очищены и не высушены, также способствуют росту плесневых грибов. Это же справедливо и для любого технологического оборудования, которое не до конца очищают и высушивают.
Очистка не является единственным способом предотвращения появления плесневых грибов, как показано выше, крайне важно наличие систем, предотвращающих попадание и размножение плесневых грибов в чистых помещениях. Очистка и дезинфекция являются хорошими средствами предотвращения и уничтожения плесневых грибов, хотя без понимания того, как работают обычные дезинфицирующие средства и что означают указания на их этикетке, процесс очистки и дезинфекции чистых помещений может не дать желаемых результатов.
Очистка и дезинфекция
Наиболее часто используемые в фармацевтической промышленности средства санитарной обработки, дезинфицирующие, обеззараживающие и чистящие средства включают: фенольные соединения, четвертичные аммониевые соединения, пероксигены, средства на основе хлора (натрия гипохлорит) и всеми любимый спирт.
Что представляют собой эти химические вещества и какова их функция в защите нашего процесса, препарата и, в конечном счете, пациента?
Средства на основе фенольных и четвертичных аммониевых соединений являются дезинфицирующими средствами общего назначения и не обязательно являются спорицидными или фунгицидными по своей природе (10). Они обладают хорошими чистящими свойствами из-за наличия в их составе поверхностно-активного вещества, которое преодолевает поверхностное натяжение при нанесении на твердые поверхности и, следовательно, позволяет равномерно покрывать поверхности чистых помещений. Спорицидные средства, например, на основе хлора и НУК (химикаты надуксусной кислоты), являются спорицидными и фунгицидными по своей природе, однако они не содержат поверхностно-активных веществ и, соответственно, не подходят в качестве чистящих средств. Спирт является дезинфицирующим средством и может не убивать некоторые бактерии. Грамотрицательные бактерии и плесневые грибы, по сути, могут использовать спирт в качестве источника пищи.
Независимо от того, проводится ли первоначальная программа дезинфекции чистого помещения или планирование квалификационного исследования дезинфицирующего средства, решающее значение имеет понимание того, как работает это средство, что указано на его этикетке и какой вид плесневых грибов наиболее распространен на производственном объекте (11). Также необходимо разобраться с тем, от чего зависит влияние этих микроорганизмов на процессы или продукт, от их количества или вида. Как объяснялось выше, плесневые грибы принадлежат к четырем различным группам. Несмотря на то, что спорицидные средства могут убивать споры плесневых грибов, следует учитывать время воздействия, силу дезинфицирующего средства и тяжесть контаминации. Среди описанных выше видов плесневых грибов легче всего уничтожить гиалиновые дейтеромицеты. Следует отметить, что производители дезинфицирующих средств должны проводить испытание своей продукции на фунгицидную активность для заявленного на этикетке применения с использованием методов испытания AOAC (8, 12). Оба микроорганизма, испытанные в США и ЕС (Trichophyton mentagrophytes и Aspergillus brasiliensis), принадлежат к группе гиалиновых дейтеромицетов. Именно по этой причине регулирующие органы требуют, чтобы компании квалифицировали дезинфицирующие средства относительно собственной внутрипроизводственной микрофлоры. Компании не любят использовать спорициды из-за едкого или отталкивающего запаха как средств на основе хлора, так и химикатов НУК, что в свою очередь увеличивает шансы контаминации плесневыми грибами.
Квалификационные исследования дезинфицирующих средств являются дорогостоящими, трудоемкими, а также весьма непонятными. Эти исследования подвержены многим ошибкам, если они выполняются персоналом, который мало или вообще не понимает:
- используемых химикатов
- природы твердых поверхностей
- метода, выбранного для нейтрализации дезинфицирующего средства
- метода, выбранного для извлечения микроорганизмов с твердых поверхностей
- жизнеспособности выбранного для испытания микроорганизма.
Кроме того, в фармацевтической промышленности не существуют стандартных методов для проведения этих исследований, хотя раздел <1072> Фарм. США содержит некоторые общие рекомендации (4). Наиболее важным соображением при планировании исследования является понимание того, что это исследование не может доказать эффективность процедур очистки. Процедуры очистки отражают химическое уничтожение микроорганизмов на основании активности дезинфицирующего средства, а также физическое удаление швабрами и салфетками. Это исследование следует проводить для группы микроорганизмов для доказательства химического уничтожения дезинфицирующими средствами на различных поверхностях в течение периодов воздействия, рекомендованных производителем или другими нормативами. Химическое уничтожение микроорганизмов в чистом помещении происходит за счет выбора правильного разведения дезинфицирующего средства, а также чередования неспорицидных дезинфицирующих/чистящих средств и спорицидных средств (11). Физическое удаление микроорганизмов с поверхностей чистых помещений достигается за счет:
- надлежащего покрытия поверхностей, очищаемых дезинфицирующим/чистящим средством
- использования чистящих швабр/салфеток надлежащего качества, которые позволяют физически удалять микроорганизмы.
Кроме того, надлежащая программа дезинфекции включает внедрение результатов исследования эффективности дезинфицирующего средства в рутинные процедуры дезинфекции. Следовательно, ненадлежащим образом проведенное исследование квалификации дезинфицирующего средства может в целом влиять на микробиологическую чистоту в чистом помещении.
Чистящие расходные материалы играют очень важную роль как в предотвращении появления плесневых грибов, так и в их уничтожении. В тряпичных швабрах грязь и загрязняющие вещества задерживаются между волокнами возле рукоятки, эти швабры трудно высушивать и они не позволяют охватить всю поверхность во время очистки. Поскольку их невозможно легко высушить, они создают благоприятные условия для размножения плесневых грибов и бактерий. Если дезинфицирующие средства, используемые в чистом помещении, не являются спорицидными по своей природе, то эти швабры фактически сами загрязняют, а удаляют загрязнение. Хлопчатобумажные тряпичные швабры еще хуже, поскольку они способствуют активному распространению плесневых грибов. Швабры, используемые для очистки чистых помещений, должны:
- позволять применять дезинфицирующие средства даже без замачивания
- позволять добраться за теплогенерирующее оборудование для очистки стен
- физически и эффективно удалять грязь и мусор
- не должны способствовать росту плесневых грибов
- не должны давать частиц.
Обработка туманом
В последнее время набирает популярность метод применения химических дезинфицирующих средств в чистых зонах путем их распыления и создания тумана или мглы. Целью является диспергирование дезинфицирующего средства и создание дезинфицирующего аэрозоля для уменьшения числа спор плесневых грибов в воздухе и на поверхностях, к которым трудно добраться во время очистки. Однако, перед тем как внедрить обработку туманом необходимо понять природу контаминирующего плесневого гриба. Как упоминалось ранее, одни плесневые грибы уничтожить легко, а другие очень сложно. Для одних плесневых грибов может быть достаточным один цикл обработки туманом, а для других видов может потребоваться несколько циклов. Часто компании, предоставляющие услуги по обработке туманом, используют биологические индикаторы для доказательства эффективности этого метода. Однако, существуют виды плесневых грибов, которые могут быть более устойчивыми, чем Bacillus, поэтому уничтожение Bacillus на уровне 5—6 log неэквивалентно аналогичному уровню уничтожения плесневых грибов. В этом случае в качестве индикатора эффективности целесообразно использовать того же плесневого контаминанта, который был изолирован в помещении.
Во время обработки туманом используемое для этого оборудование перенасыщает атмосферу туманом дезинфицирующего средства, при этом охватываемая зона будет варьировать в зависимости от используемой прикладной системы. В типичных условиях обработка туманом выполняется в течение не менее 15—30 минут для того, чтобы туман мог полностью распределиться в помещении и оказать химическое воздействие. После обработки туманом требуется выдержка в течение дополнительного периода времени около 45—60 минут для того, чтобы капли средства осели из воздуха и на поверхностях. Электризация химических туманов при аэрозолизации может повысить эффективность их применения, вследствие притяжения капель к поверхностям с электрическим зарядом. Обычно в фармацевтической промышленности используются следующие технологии обработки туманом:
- парообразный водорода пероксид (VHP), который широко используется для дезинфекции окружающей среды на фармацевтическом производстве, включая чистые помещения и производственные линии розлива
- надуксусная кислота и водорода пероксид, которые используются для дезинфекции чистых помещений, холодильных помещений, боксов биологической безопасности, инкубаторов и т. д.
Как правило циклы деконтаминации состоят из следующих этапов:
- увлажнение/осушение (в зависимости от технологии),
- кондиционирование,
- испарение и
- аэрация для удаления остатков дезинфицирующего средства.
Вывод
Для предотвращения появления, контроля и уничтожения плесневых грибов важно понимать природу исследуемых плесневых контаминантов. Невозможно предотвратить попадание плесневого гриба в чистое помещение, если не известен его источник. Знания о виде плесневого контаминанта приведут к источнику, который в последствии можно исправить или устранить. Существует множество путей проникновения плесневых грибов в чистое помещение, поэтому наличие надлежащих операционных процедур может снизить количество плесневых грибов в технологических средах чистых помещений. Выбор дезинфицирующих средств, используемых для борьбы с контаминацией плесневыми грибами в чистом помещении, является комплексным решением, поскольку нет единого дезинфицирующего средства, которое было бы эффективно против всех видов плесневых грибов и обладало свойствами поверхностно-активного вещества для обеспечения надлежащей очистки. Выбор наилучшей программы дезинфекции предполагает наличие знаний о преобладающих видах плесневых грибов, присутствующих на производственном объекте. Этот процесс включает не только выбор химических средств, но и практические соображения касательно методов применения и типов расходных материалов, которые обязательно необходимо учитывать для контроля плесневых грибов. Процедуры очистки чистых помещений должны охватывать как химическое уничтожение с помощью эффективных дезинфицирующих средств, так и подходящее физическое удаление с помощью соответствующих средств очистки, например, допустимых для использования в чистых помещениях и не выделяющие частиц швабр. Физическое удаление контаминации не менее важно, поскольку средства очистки не должны способствовать росту микроорганизмов, должны позволять выполнить очистку поверхностей в труднодоступных местах, а также должны обеспечивать удержание дезинфицирующего средства и его доставку в необходимое место. Для уничтожения контаминации плесневыми грибами может использоваться обработка туманом, однако эффективность этого метода следует оценивать относительно уничтожаемого плесневого гриба.
Литературные источники
- Vijayakumar, T. Sandle, and C. Manoharan, (2012). “A Review of Fungal Contamination in Pharmaceutical Products and Phenotypic Identification of Contaminants by Conventional Methods,” European Journal of Parenteral and Pharmaceutical Sciences 17 (1), 4-19, 2013.
- Sutton, A. Fothergill, and M. Rinaldi, Guide to Clinically Significant Fungi, Williams & Wilkins, Maryland, US, 1998.
- Griffin and D. Reber, Microbial Identification: The Keys to a Successful Program, PDA, Bethesda, MD, DHI Publishing, LLC, River grove IL, USA.
- St-Germain G, Summerbell R, Identifying Filamentous Fungi, A Clinical Laboratory Handbook, Star Publishing Company, Inc., Belmont, California, USA, 2012.
- Watanabe, Pictorial Atlas of Soil and Seed Fungi, Morphologies of Cultured Fungi and Keys to Species, CRC Press, Florida, US, 2002.
- L. Barnett and B. Hunter, Illustrated Genera of Imperfect Fungi, APS Press, St. Pail, Minnesota, US, 1998.
- Andersen, J. Frisvad, S. Rasmussen, and L. Larsen , “Associations between Fungal Species and Water-Damaged Building Materials,” Environmental Microbiology 77 (12), 4180-4188, 2011.
- EN 1650, Quantitative Suspension Test for the Evaluation of Fungicidal Activity of Chemical Disinfectants.
- Sandle, “Dimorph and Filamentous Fungi,” in Mascellino, M. T. (Ed.) Bacterial and Mycotic Infections in Immunocompromised Hosts: Clinical and Microbiological Aspects, (OMICS Group Inc.: Henderson, NV, US, 2013)
- S.S. Block, ed., Disinfection, Sterilization, and Preservation, Lippincott, Williams and Wilkins, Philadelphia, PA, 2001.
- Madsen and J. Moldenhauer, Contamination Control in Healthcare Product Manufacturing, PDA, Bethesda, MD, DHI Publishing, LLC, River Grove IL, US, 2013.
- AOAC, International Official Methods of Analysis, 15th, 16th and 17th ed., Arlington, VA, US.
По материалам IVT Network
